PCR анализ за хепатит С

Вирусният хепатит С е едно от най-опасните и трудни за диагностициране заболявания. Проблемът е, че често това заболяване се открива само на по-късни етапи поради факта, че основната му форма е хронична, а СНС е асимптоматична. Въпреки това, ранната диагностика ви позволява да изберете най-подходящото лечение, което ще ви помогне да забравите за вирусното възпаление на черния дроб завинаги..

Един от най-универсалните методи за определяне на HCV е полимеразната верижна реакция (PCR). Но какво е PCR анализ за хепатит С? Какви са характеристиките на това тестване? Как PCR анализът за хепатит С се различава качествено от количествения? Как се дешифрира резултатът от теста? Можете да намерите отговори на всеки от тези въпроси в нашата статия..

Диагностика на HCV чрез PCR

Полимеразната верижна реакция е един от най-често срещаните и точни методи за диагностициране на HCV. Но какво показва PCR тестът за хепатит С? Резултатите от теста позволяват да се определи наличието на флававирус в тялото на гостоприемника, както и степента на вирусно натоварване в тялото му..

За анализ се използва проба от венозна кръв на пациента, взета в деня на изследването. Взимането на PCR тест за хепатит С се препоръчва за следните категории лица:

  • Пациенти с открити имуноглобулини към антигени на причинителя на HCV
  • За жени по време на бременност
  • Медицински работници, които са постоянно в контакт със заразени телесни течности
  • Пациенти с анамнеза за предварително излекуван вирусен хепатит
  • Пациенти с очевидни симптоми на увреждане на черния дроб

PCR тестът за хепатит С може да бъде качествен или количествен. И двата метода се използват активно при диагностицирането на HCV. Нека разгледаме по-подробно характеристиките на качествения и количествен PCR анализ за хепатит С.

Качествено тестване

Извършва се качествен отговор, ако предварително установена диагноза HCV изисква потвърждение. Резултатите от теста могат да бъдат положителни или отрицателни. Положителната реакция показва наличието на инфекциозен агент в тялото на субекта. На свой ред отрицателният резултат показва или липсата на патогена, или неговата незначителна концентрация..

Какво представлява PCR за хепатит (качествен анализ)? Това тестване помага окончателно да се определи диагнозата. Цената на прилагането му в Москва, в зависимост от клиниката, варира от 1800 до 3000 рубли.

Количествен отговор

Кръв за количествена полимеразна верижна реакция се дава, ако диагнозата вече е установена. Анализът ви позволява да определите патогенното натоварване в тялото на пациента в момента. По този начин лекуващият лекар получава информация за това коя област на черния дроб е засегната от флававируса и може да избере терапевтичния режим, необходим в даден случай..

Колкото по-високи са параметрите на патогена в кръвта на пациента, толкова по-сериозен ще бъде стадийът на заболяването. Цената на количествена полимеразна верижна реакция в московските клиники варира от 1800 до 4000 рубли, в зависимост от избора на медицинско заведение.

Подготовка за PCR тест за хепатит С

И така, отговорът на въпроса "Какво е PCR анализ за хепатит С?" намерен. Но как се подготвяте за предстоящата диагноза? Когато се подготвя да дари кръвна проба за PCR тест за хепатит С, пациентът трябва:

  • Няколко дни преди да пристигнете в лабораторията, напълно изоставете бързото хранене и други тежки и мазни храни
  • В рамките на 24 часа преди да вземете PCR теста за хепатит С, не пийте алкохол и не се въздържайте от пушене
  • Не яжте 8 часа преди поставяне на диагнозата
  • За ваша собствена безопасност, преди да поставите инжекционна игла във вена, уверете се, че здравният работник използва само стерилна спринцовка за еднократна употреба

Взема се много малко кръв за полимеразната верижна реакция. Следователно след процедурата пациентът не се нуждае от рехабилитация. Ето защо, веднага след процедурата, пациентът се прибира вкъщи. Диагностиката се извършва сутрин.

Декодиране на PCR анализ

Декодирането на PCR теста за хепатит С се извършва в медицинска лаборатория. Допустимата грешка в крайните резултати зависи от компетентността на здравните работници, както и от това как субектът е спазвал правилата за подготовка за тестване..

В случай на качествен PCR анализ за хепатит С е важно да се вземе предвид прагът на чувствителност на реагентите, който варира в рамките на 10-500 IU / ml. Висококачествената полимеразна верижна реакция може да има само 2 резултата:

  • Положителен. Диагнозата на вирусен хепатит С се потвърждава от откриването на флававирус в кръвта на пациента. Концентрацията на патогена в кръвната плазма е достатъчна за поставяне на диагноза. Ако диагнозата е извършена след лечение, такъв резултат показва неефективността на терапията..
  • Отрицателни. Патогенът липсва или концентрацията му в кръвта е изключително ниска. Такъв резултат не винаги показва липса на инфекция. На субекта се препоръчва да премине допълнителни тестове за чувствителност към реагенти.

За да разберете какво показва PCR анализът за хепатит С при количествено тестване, трябва да започнете от средния индикатор, равен на 8x10 ^ 5 IU / ml (800 000 IU / ml).

Ако нивото на патогенно натоварване е под или равно на средното, на пациента се предписва лекарствена терапия, базирана на лекарства с пряко антивирусно действие. Ако цифрата е над 800 000 единици, лекуващият лекар ще трябва да помисли за по-сериозни мерки за борба с HCV. Пациентът може да се нуждае от чернодробна трансплантация.

Определянето на вирусен хепатит С чрез PCR се извършва в много лечебни заведения на столицата. В същото време тестването може да се извършва както в болнични, така и в амбулаторни условия..

PCR анализ за хепатит С: къде и как да го преминете правилно, което означава положителен и отрицателен резултат

PCR за хепатит С е задължителен анализ при изследване на пациент със симптоми на чернодробно увреждане. Изследването се предписва, за да се потвърди диагнозата и да се получи най-пълната информация за причинителя на заболяването, активността на вирусната инфекция. Резултатите служат като основа за предписване на антивирусна терапия, определяне на нейната продължителност и оценка на нейната ефективност..

Диагностиката, използваща техниката на полимеразна верижна реакция, стана широко разпространена сравнително наскоро. Изследвания по тази тема се провеждат от средата на 70-те години. Но първите публикации за възможността за използване на PCR в практическата медицина се появяват едва в средата на 80-те години..

  • Видове PCR
  • Показания за теста
  • Къде да взема?
  • Правила за кръводаряване
  • Декодиране на резултатите
  • Плюсове на PCR диагностиката
  • Разходите

Когато обясняват какво е PCR, лекарите подчертават, че това е най-надеждният и надежден анализ за хепатит С. Този тест позволява не само да се идентифицират РНК частиците на вируса, но и да се установи неговата концентрация (показва активността на инфекциозния процес) и генотипа. Получените резултати играят ключова роля при определяне на тактиката и схемата на по-нататъшната терапия..

Каква е същността на организирането на реакция? С помощта на определени биологично активни вещества се постига увеличаване на броя на РНК частиците на вируса в малък обем кръв. Впоследствие части от генома се определят чрез различни физикохимични методи.

PCR се извършва с помощта на няколко компонента:

  • Грунд. Това е изкуствено синтезирано съединение, в което нуклеотидната последователност е напълно идентична на специфична област на РНК на вируса, която не претърпява мутации и промени в зависимост от генотипа. Определянето на РНК на вируса на хепатит С се извършва със строго специфичен праймер.
  • РНК полимераза. Ензим, характеризиращ се със стабилност и структурна стабилност на фона на температурни промени, необходими за правилния ход на химична реакция. Осигурява изграждането на РНК верига на един от етапите на PCR.
  • Протеинова смес. За изграждане на допълнителни участъци от РНК е необходим „строителен материал“, за който определени съединения от протеиновата структура се добавят към биологичната проба.
  • Буфер. Смес, която поддържа оптималното ниво на pH за осигуряване на потока на полимеразната верижна реакция.
  • Проба от биологичен материал, за който се подозира, че съдържа проба от РНК на HCV (вирус на хепатит С).

В някои методи за поставяне на PCR допълнително се използват РНК сонди и други вътрешни контроли, които се използват като контролни проби при идентифициране на резултатите.

Самият процес на увеличаване на областите на вирусна РНК с помощта на матрица се нарича амплификация. Реакцията протича на няколко етапа:

  1. Денатуриране. Процесът на "размотаване" на РНК нишките се осигурява чрез повишаване на температурата до определено ниво.
  2. Отгряване. След намаляване на температурата до необходимите стойности, праймерите се прикрепят към РНК. Този етап е възможен само ако желаните вирусни частици присъстват в кръвната проба..
  3. Директен синтез на вирусни РНК области с участието на ензими.

Изброените цикли на PCR стадиране се повтарят няколко десетки пъти, което осигурява многократно увеличение на броя на РНК регионите на причинителя на хепатит С на нивото, определено с лабораторни методи.

Кръвната проба се приготвя по подходящ начин преди тестване. Съдържащата се РНК се адсорбира върху носител буфер, след това се измива и използва за иницииране на полимеразна верижна реакция.

Детекцията на резултатите се извършва или чрез електрофореза (хоризонтална или вертикална), или чрез хибридизация. Методът за декодиране на резултатите от реакцията се избира въз основа на целите на изследването (просто идентифициране на РНК или определяне на приблизителното й количество).

PCR - най-точният кръвен тест за хепатит С

Списъкът на предложените проучвания за HCV включва няколко елемента, които се различават по цена, време за готовност и начин на изпълнение..

Позовавайки се на протоколите на Световната здравна организация (СЗО), процедурата за диагностициране на инфекция включва няколко последователни етапа..

Като начало наемете:

  • общ анализ на кръв и урина;
  • кръвна биохимия;
  • изследване на съдържанието на глюкоза (стриктно на гладно);
  • Тест за ХИВ;
  • флуорография;
  • имунограма (ако подозирате наличието на автоимунни патологии).

Ако параметрите на биохимичния кръвен тест се отклоняват от физиологичната норма, на пациента се предписва тест, основан на откриване на специфични антитела, произведени от контакта на вируса с кръв (ELISA).

Но такъв кръвен тест за хепатит С има значителен недостатък. Процесът на синтез на антитела зависи от функционирането и производството на имунокомпетентни клетки. Индивидуалните характеристики на тялото могат да предизвикат както фалшиво отрицателни, така и фалшиво положителни отговори..

Преди да предпише тест ELISA, лекарят съобщава на пациента за възможна грешка, което поражда отговор на въпроса: "Кой кръвен тест показва хепатит С с минимален риск от получаване на неправилни резултати?" За потвърждаване или опровержение на диагнозата най-точният лабораторен тест е PCR в реално време.

По-нататъшните тактики на действие зависят от това, което показва изследването. Ако диагнозата бъде потвърдена, на пациента незабавно се предписват хепатопротектори, предупреждавани за важността на правилното хранене и здравословния начин на живот. Но насочената терапия е невъзможна без определяне на вирусното натоварване и генотипа на хепатит С..

Някои лекарства могат да провокират обостряне на хепатит В. Следователно, за да се изключат усложненията, допълнително се предписват тестове за HBsAg. HCV се лекува само след отрицателен резултат от теста.

Видове: Качествен, Количествен и Генотипизиране

При първоначалната диагноза на хепатит С титърът на произведените антитела се определя чрез серологичния метод. Този резултат приблизително показва активността на патологичния процес. Но лекарят може да получи най-точната информация само след изучаване на PCR данните.

Понастоящем в почти всички лаборатории се извършва анализ с помощта на свръхчувствителен метод. По този начин диагнозата HCV е възможна в рамките на 10-14 дни след инфекцията, по-рядко - след 2,5-3 седмици. В зависимост от целите, преследвани по време на проучването, лекарят предписва специфичен вид тест.

Има следните видове PCR:

  1. Качествен. Когато предписват диагностични тестове, пациентите имат въпроса какво показва този метод на изследване. Качественият анализ чрез PCR метод е високо чувствителен тест, който определя наличието на вирусна РНК в кръвта при минимална концентрация. Обикновено този вид полимеразна верижна реакция се извършва с помощта на технология за обратна транскрипция. Това е един от малкото PCR методи, при които РНК може да се използва като мишена.
  2. Количествено. Количественото определяне на хепатит С ви позволява да определите точното ниво на HCV РНК в кръвта. Изследването е възможно само по един начин - методът в реално време. По време на подготовката на материала за PCR към пробата се добавя багрило. След всеки цикъл на усилване се извършва автоматизирано количествено изследване в реално време. Техниката често се извършва в комбинация с обратна транскрипция. По този начин е възможно качествено да се определи малкият брой РНК копия на вируса. Има смисъл количествено да се установи нивото на HCV РНК, ако се получи положителен резултат от качествена PCR..
  3. Генотипиране. Анализът се извършва на последния етап от диагностичния процес. Принципът на изследването се основава на разликата в нуклеотидната последователност, която отличава един генотип на вируса на хепатит С от друг. Обикновено анализът се извършва чрез PCR с много праймери (мултиплекс).

Ако подозирате носител на вируса, е необходимо да извършите висококачествена PCR. Ако резултатът е отрицателен, човекът най-вероятно е здрав. Но за да се изключи напълно инфекцията, препоръчително е да се повтори проучването след 7-10 дни. Ако се открие РНК на вируса, се провеждат допълнителни тестове (количествени и генотипиране).

Показания за лабораторно изследване

Основната индикация за даряването на кръв за хепатит С по метода на полимеразната верижна реакция е положителен ензимен анализ (независимо от вида: Общо, диференциран тест за IgG и IgM).

Освен това трябва да проверите:

  • по време на бременност (тестът се прави два пъти - през първия триместър и 7-10 седмици преди раждането);
  • при работа с повишен риск от инфекция (медицински сестри, лаборанти, служители на донорски центрове, козметолози и др.);
  • с безразборни сексуални контакти и незащитен контакт с непознат човек;
  • на фона на ХИВ, рак, прием на някои лекарства и др.;
  • интравенозни наркомани;
  • с постоянно провеждане на инвазивни диагностични или терапевтични процедури;
  • с кръвопреливане, извършено преди 1992 г. (преди не е имало надеждни начини за проверка на биологичния материал на донора за наличие на вирус).
  • когато отворена рана влезе в контакт с чужда кръв, нестерилизирани медицински инструменти.

Честотата нараства всяка година. Следователно за ранно откриване на инфекция се препоръчва да се правят лабораторни тестове за HCV веднъж годишно..

Къде да се тествате

Когато се свърже с клиниката, пациентът има право на безплатни тестове. Но първо те правят тест ELISA. И само с положителен или съмнителен резултат е показано PCR изследване. Следователно, спешна диагноза може да се направи, като се свържете с платена лаборатория, където можете да дарите кръв за PCR в удобно за пациента време. В същото време се препоръчва незабавно да се проверят показателите на чернодробните ензими, стандартните клинични параметри на кръвта.

По правило изследването на кръвта чрез PCR се предлага в почти всяка лаборатория. Ако точката за вземане на кръв не е оборудвана с подходящо оборудване, биологичният материал се транспортира за изследване в съответствие с температурния режим и други условия. PCR в поликлиника е възможно само след други изследвания, резултатите от които косвено показват наличието на хепатит С.

Как да дарявате кръв правилно

Преди да дарите кръв за откриване на възможен вирус, трябва да следвате редица правила за подготовка за анализа..

Основните аспекти са посочени в бележката:

  1. За 5-7 дни спрете да консумирате мазни, пържени храни, алкохол. Като цяло лекарите препоръчват да се спазват хранителните правила за диета номер 5.
  2. Не яжте 12-14 часа преди проучването. Можете да пиете само вода.
  3. По-добре е да дарявате кръв сутрин..
  4. Не пушете преди процедурата.

Трябва също да предупредите лекаря за взетите лекарства, възможни здравословни проблеми, хронични заболявания..

Кръв се взема от вена. След края на процедурата медицинската сестра запечатва мястото на пункцията със стерилен гипс, предупреждава за необходимостта да се огъне ръката и да се задържи в това положение за 10-15 минути. В противен случай вероятността от болезнен хематом е висока..

Колко време отнема изследването?

Колко анализ се прави зависи от лабораторията. Средното време за изпълнение варира от 1-3 дни. Някои клиники предоставят платена услуга за бързо PCR изследване, но времето е ограничено от възможностите на медицинското оборудване..

В клиниката резултатите могат да бъдат предадени на лекаря в рамките на 7-10 дни. Това е свързано с голям наплив от пациенти. В същото време биологичният материал се съхранява в съответствие с всички изисквания.

Декодиране на резултатите

По правило декодирането на висококачествена PCR не е трудно. Но за да избегнете погрешно тълкуване, с формуляра, получен от лабораторията, трябва да се консултирате с лекар. Опциите, което означава този или онзи тип PCR, са показани в таблицата.

Отрицателно: човекът е здрав или концентрацията на вирусна РНК в кръвта е твърде ниска за откриване.

Положително: човекът е заразен

Провежда се, ако РНК на вируса се открие чрез качествен метод на изследване.

В зависимост от получените резултати от теста се определя нивото на вирусно натоварване

Проведено за хепатит С, потвърдено от други изследователски методи.

Анализът ви позволява да установите точния генотип на патогена на патологията

Но често възниква ситуация, когато ELISA за хепатит С е положителен, а PCR е отрицателен. Само лекар може да дешифрира такива резултати от теста..

Такива данни обаче са възможни в следните случаи:

  • бременност;
  • прехвърлен в остра форма на хепатит С;
  • Лечението с HCV завършено;
  • наличието на инфекции, които увеличават вероятността от фалшиво положителен резултат от ELISA.

Само полимеразната верижна реакция показва точното наличие на вирусна инфекция в организма. На фона на отрицателна PCR, положителната ELISA в повечето случаи показва, че лицето не е заразено. Но лекарят трябва да определи точната причина за фалшиво положителния резултат..

Качествен анализ

Качествен PCR анализ за хепатит С потвърждава наличието на патогена в кръвта. Ако РНК на вируса не бъде открита, човекът е здрав. Но ако има съмнение за инфекция, препоръчително е да се подложи отново на изследването. Положителният резултат показва инфекция. Но този анализ не позволява да се разграничи хроничният хепатит С от острия и не може да покаже колко активен е патологичният процес..

Количествен тест

Количественият анализ чрез PCR се извършва след потвърждаване на диагнозата и неговото декодиране е важно за определяне на тактиката на лечение. В зависимост от концентрацията на частици от причинителя на хепатит С се различават няколко степени на вирусно натоварване: средна, висока и ниска. Колкото по-висок е показателят, толкова по-тежка е инфекцията и толкова по-трудна е терапията. Обикновено вирусната РНК липсва в кръвта.

Генотипиране

Много лаборатории извършват генотипиране заедно с количествена PCR, което спестява пари. Такова проучване се прави само веднъж, преди започване на лечението. Обикновено се извършва анализ за един от четирите най-често срещани генотипа (1, 2, 3 или 4). Подтипът на HCV се определя едновременно. Генотипирането за подвидове 5 и 6 на хепатит С не е възможно във всяка лаборатория.

Плюсове на PCR диагностиката

Диагностиката чрез PCR метод е широко разпространена поради:

  • висока точност (при условие, че се използват тестови системи от последно поколение);
  • лекота на вземане на проби от биоматериал;
  • бързи резултати (максимум 5 дни).

Но основното предимство се крие в широките диагностични възможности на изследването. Анализът позволява не само да се идентифицира вирусът, но и да се определи точно концентрацията му в организма и да се установи генотипът на инфекцията. Освен това са необходими количествени изследвания за оценка на ефективността на антивирусната терапия. Основната цел на лечението е да се постигне честотата на теста (т.е. неоткриваемо ниво на HCV РНК) на 4, 12 или 24 седмици от антивирусния курс и да се поддържа този резултат.

Разходите

Цената на PCR анализа варира в зависимост от региона. И така, в Москва цените са по-високи. Висококачествената PCR ще струва 600-800 рубли, количествената - 2200-3000 рубли, генотипирането - от 1000 рубли. Можете да разберете точно колко струва конкретно изследване директно в лабораторията, на уебсайта на медицинска организация или по телефона.

Качествен анализ за хепатит С: декодиране

Причината за развитието на вирусен хепатит С е инфекция с патоген, който принадлежи към семейство Flaviviridae. Открива се дълъг интервал от време между инфекцията и началото на производството на антитела, което не позволява навременна диагностика на заболяването чрез ензимен имуноанализ.

При съмнение за инфекция се извършва PCR анализ за хепатит С, биохимия, CBC, чернодробни тестове. Чрез полимеразната верижна реакция е възможно да се открие вирусът в кръвта дори през първата седмица на инфекцията, което е доминиращото предимство на метода.

Количествен и качествен анализ за хепатит С и характеристики на изследването, как да се подготвим, има ли грешки, декодиране - ще разгледаме подробно.

Какво представлява методът на полимеразна верижна реакция?

Полимеразната верижна реакция е молекулярна изследователска техника за определяне на генетичния материал на вирусен агент от първите дни на инфекцията. Анализът се характеризира с висока степен на надеждност, специфичност и точност. Благодарение на него се открива не само отсъствието / присъствието на вируса, но и вирусното натоварване (количествена стойност), генотип.

За изследването е необходима кръвта на пациента, в която вероятно се намира РНК на вирусна инфекция. В лабораторни условия към биологичната течност се добавят праймери - това са изкуствено синтезирани фрагменти от желания ген с малка дължина. Плюс РНК полимераза - специализиран ензим, който умножава концентрацията на желания материал.

Освен това кръвта с добавяне на компоненти се загрява и охлажда няколко пъти в специално устройство. След това следва анализ на получените резултати, сравнение с известните гени на вирусния агент. Въз основа на това се прави заключение за заболяването.

Разновидности на PCR изследвания

Анализът за PCR на хепатит С се извършва в лабораторията с добавяне на необходимите реактиви, има три разновидности с отличителни характеристики:

  1. Качественият PCR анализ за хепатит С е първият етап от изследването. Чрез него генетичният материал на патогена се открива в кръвния серум.
  2. Количествено проучване ви позволява да оцените вирусното натоварване - това е съдържанието на вирусен материал в 1 ml кръв на пациента. Извършва се преди започване на курса на лечение и след 1-4-12 седмици терапия. Когато курсът е дълъг, изследването трябва да се извърши след 24 седмици терапия, за да се оцени ефективността.
  3. Генотипиране. Инфекциозно заболяване се развива бързо, вирусът има тенденция да мутира. Следователно е необходимо да се идентифицира генотипът на вируса.

Учените са идентифицирали 7 генотипа на вируса. В Руската федерация 1-2-3 вида са много разпространени.

Всеки от генотипите се характеризира с устойчивост на лечение.

Например при тип 1 ефективността на терапията е около 60%, на фона на 2-3 вида показателят достига 85%.

За да се намерят правилните лекарства, продължителността на лечението, се изисква да се идентифицира не само фактът на инфекцията, но и концентрацията на вируса, неговия генотип.

Показания за

Маркерите за хепатит, PCR и ELISA, други тестове имат определени медицински показания:

  • Когато пациентът има анамнеза за ХИВ инфекция, СПИН.
  • Контакт със заразен човек, тъй като вирусният хепатит е силно заразен.
  • Симптоми на циротично увреждане на черния дроб - хепатомегалия, увеличаване на размера на далака, венозен модел се появи на корема и др..
  • Клинична картина на функционални чернодробни нарушения - периодична / постоянна болка в десния хипохондриум, пожълтяване на кожата, гадене.
  • Високи стойности на AST и ALT в биохимията на кръвта.
  • По време на бременност, когато тестовете за чернодробна функция са лоши.
  • Преди да започнете антивирусен курс за определяне на вирусно натоварване.
  • За проследяване на ефективността на терапията.
  • След терапия за предотвратяване на рецидив на вирусна инфекция.

PCR се извършва с потвърдена диагноза хепатит В, за да се изключи смесен тип увреждане на черния дроб.

Подготовка за изследване и вземане на проби от материал

Как да се подготвите за анализа, лекарят ще каже. Препоръчва се подготовка на пациента, за да се получи точен резултат. Състои се от следните препоръки:

  1. Анализът трябва да се прави сутрин на гладно. Преди вземане на кръв е разрешено да се пие само чиста, негазирана вода. Последно хранене - 8 часа преди събирането.
  2. Ако не можете да направите теста сутрин, можете да го направите вечер или по обяд, най-важното - 5-6 часа след хранене, не по-рано.
  3. Откажете се от алкохолни напитки, кофеинови напитки, сокове 48 часа преди проучването.
  4. В продължение на 2 дни трябва да спазвате диета, като изключвате всички вредни продукти. Някои лекари обаче смятат, че мазните, пържени храни не влияят на точността на PCR теста..

Не приемайте лекарства 24 часа преди медицинска манипулация. Ако това не е възможно, информирайте Вашия лекар. Анализът не се препоръчва да се извършва веднага след ултразвук, КТ, масаж и други физиотерапевтични процедури.

Вземането на кръв се извършва, както следва:

  • С помощта на специален турникет, който е затегнат върху предмишницата на пациента, лекарят спира венозния кръвен поток. Вените стават по-видими, което улеснява поставянето на игла, след което вземането на кръв.
  • Областта на кожата преди въвеждането на стерилна игла се третира с течност, съдържаща алкохол.
  • Във вената се вкарва игла, след което към нея се закрепва епруветка, в която тече кръв.
  • След въвеждането на иглата, турникетът се отстранява. Съберете необходимото количество кръв, извадете иглата.
  • На мястото на инжектиране се нанася памучен тампон, потопен в алкохол.

За да се предотврати образуването на синина на мястото на инжектиране на иглата, е необходимо да притиснете памучния тампон достатъчно силно към нараненото място, да огънете ръката и да я задържите в това положение за 3-4 минути.

Ако пациентът приема лекарства, които разреждат кръвта (аспирин, варфарин), може да има определени проблеми със спирането на кървенето.

Предимства на PCR пред други тестове

Методът на полимеразна верижна реакция има определени предимства пред другите диагностични техники..

Предимствата на изследването са представени в таблицата:

Тип проучванеВъзможен резултат и предвидена стенограма
Висококачествена PCR
Количествено
Генотипиране
Директна диагноза на причинителя на патологиятаДруги изследвания ни позволяват да дадем отговор - има ли патоген в организма или не. Но използвайки PCR техники, можете конкретно да установите вида на вирусния агент.
Специфичност на изследванетоPCR открива уникално парче ДНК, което съвпада само с един вид вирусен агент. Това минимизира възможността за грешка..
Висока степен на чувствителностВъзможно е да се открие дори минимална концентрация на вируса в кръвта.
Определяне на всички патогениПо време на изследването могат да бъдат открити всички патогенни агенти.
Латентни инфекцииВ допълнение към вирусния патоген могат да бъдат открити инфекции, които имат латентен ход, отличават се с висока антигенна активност..

Когато пациентът получи положителен резултат, това ще означава, че генетичният материал на причинителя на хепатит е открит в биологичната течност. Общо отрицателно - няма следи от вируса.

Декодиране на резултатите

Лекарят трябва да дешифрира резултатите въз основа на заключението, което пациентът получава в лабораторията. Необходимо е да се анализират данните във връзка с показатели за биохимия, CBC, ултразвук.

Качествен

Качествено проучване ще покаже наличието или отсъствието на причинителя на вирусно заболяване в човешката кръв. Вариантите могат да бъдат два - отрицателен (норма) или положителен резултат.

Формата понякога казва: намерен или не намерен.

Положителен резултат - лаборантът идентифицира генетичния материал на вирусния агент в кръвта на пациента, инфекцията беше потвърдена. Отрицателно заключение - няма инфекция, РНК фрагментите на вируса са под границите на чувствителност.

Количествено

Количественият анализ предполага няколко варианта за резултатите. За удобство ще ги представим под формата на таблица..

РезултатДекодиране
ОтрицателниТова е норма за здравия човек. Това означава, че в изследвания биологичен материал няма вирусна хепатитна РНК, или съдържанието е по-малко от праговете на чувствителност.
До 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlПоказва, че съдържанието на РНК е по-малко от количествения диапазон. Този резултат трябва да се тълкува внимателно, защото се счита за противоречив. Освен това се провеждат други проучвания за последващо сравнение. Също така повторете PCR теста.
До 8 * 10 ^ 5 IU / mlНиско вирусно натоварване. По правило този резултат означава, че лечението е ефективно..
От 8 * 10 ^ 5 IU / mlВисоко вирусно натоварване. Лечението се изисква незабавно (ако не се проведе) или е необходима корекция на лекарството.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlРНК е по-голяма от горния максимум за количествено определяне. На фона на такъв резултат вирусният товар не се оценява. Необходимо е второ проучване с разреждане на проба от биологична течност.

Генотипиране

Резултат - намерена е рибонуклеинова киселина със специфичен генотип. Освен това са посочени генотипът и подтипът, лаборантът кодира заключението с латински букви и цифри. Например, генотип 1а. Разграничават се общо 7 генотипа, 67 подтипа.

Резултат - открита е вирусна РНК на хепатит С - това е ДНК на рядък генотип, който не може да бъде отнесен към често срещани вирусни агенти, поради което е необходима допълнителна диагностика.

Когато PCR е отрицателен и ELISA е положителен

Дешифрира заключението на лаборант хепатолог или специалист по инфекциозни болести. Винаги съществува риск от получаване на фалшиво отрицателен или фалшиво положителен резултат. Понякога се случва PCR да е отрицателна, а ELISA положителна.

Това означава, че в момента в кръвта на пациента няма вирус, но той е претърпял остро заболяване. Общоприето е, че ELISA показва антитела, които се произвеждат от имунната система след инвазията на патогена в тялото..

ELISA, в сравнение с PCR, се характеризира с ниска надеждност и надеждност, поради което се използва като първичен скрининг. Когато се диагностицира вирусен хепатит, полимеразната верижна реакция е незаменима.

Разходите за тестване за хепатит С

Можете да вземете тестове в болницата, където се наблюдава пациентът, ако има лаборатория там, или можете да отидете в частен център на платена основа.

За кратко време можете да получите резултат в лабораторни центрове като Gemotest, Invitro, Helix.

Разходи за изследване в зависимост от лабораторията:

Наименование на лабораторната службаЦенова политика
Спирала· Цената за вземане на проби от биологичен материал - 170 рубли.

Качествени + количествени изследвания по PCR метод - 3990 рубли.

Откриване на антитела на вирусно заболяване - 1500 рубли (2-3 дни).

Проверка на активността на вируса преди започване на курса на терапия - 4090 рубли.

ИнвитроКоличествено откриване на РНК на вируса на хепатит С чрез PCR - 3140 рубли.

Събиране на биологичен материал (венозна кръв) - 199 рубли.

Оценка на вирусното натоварване с откриване в реално време - 18 000 рубли.

Висококачествен ултрачувствителен тест - от 3000 рубли.

Генотипиране - от 1250 рубли.

ХемотестКоличествена цена за изследване 2200 рубли.

Висококачествена диагностика от 700 рубли.

Определяне на РНК на патогена - от 4000 рубли.

Вземане на кръв от вена около 150 рубли.

Продължителността на проучването е средно 2-3 дни. В някои лаборатории има спешна служба за анализ, цената й е 1,5-2 пъти по-висока. Също така е възможно да се обадите на медицински специалист, за да дарите кръв, и да получите резултатите по имейл или лично, когато се свържете с лабораторията..

PCR диагностика за хепатит: как да дешифрирам, таблица

PCR анализ за хепатит - какво е това и защо се прави

Същността на PCR анализа е, че част от изследвания ген е принуден да се размножава в епруветка, използвайки специални ензими и условия. PCR анализът за вируси на хепатит ви позволява да определите щама на вируса, без който е невъзможно да се проведе ефективно лечение: всеки генотип е различно чувствителен към антивирусни лекарства.

Използват се два вида PCR:

  • качествени;
  • количествен.

Антивирусната терапия се нуждае от постоянно наблюдение, за да се коригира навреме лечението; за тези цели се използва и полимеразната верижна реакция.

Качествена и количествена PCR

Качествената PCR за хепатит дава отговор: има ли вирусен щам в кръвта на пациента и кой. Генотипизирането е необходимо, за да се изясни диагнозата, прогнозата на заболяването и да се определи времето за лечение.

Когато се потвърди наличието на вируса, се извършва количествена PCR за хепатит, с помощта на която се изчислява броят на РНК молекулите в лабораторната проба на пациента.

Подготовка за PCR анализ за хепатит

За анализ по метода на реакцията на полимераза е необходима венозна кръв. Това трябва да се прави сутрин на гладно..

Пациентът трябва правилно да се подготви за изследването:

  • В продължение на 10 часа, за да откажете храна, можете да пиете само чиста вода.
  • Спрете да пиете алкохол предния ден, не пушете в продължение на 4 часа.
  • Преди прегледа трябва да се избягва физически и емоционален стрес..
  • За 2 дни, за да спрете употребата на наркотици, ако това не е възможно, е необходимо да предупредите лаборанта. Някои лекарства влияят на крайния резултат.

PCR анализ за хепатит С

Ако PCR тестът за хепатит С дава положителен резултат, това показва, че патогенният микроорганизъм непрекъснато се дели и заразява чернодробните клетки.

Последващата количествена PCR за хепатит С се измерва в международни единици на 1 ml или IU / ml, което означава колко копия на рибонуклеинова киселина от определен щам на вируса С се намират в 1 ml от изследваната кръв.

Таблицата по-долу показва декодирането на количествено проучване за хепатит С чрез PCR:

Вирусен товар, копия / mlОценка на натоварванетоЕстеството на репликацията на патогена
103 и по-малкоМного нискоНеактивен
104 - 105НискаПо-често неактивни
106УмереноАктивен
107ГолямСилно активен
  1. Ниският вирусен товар е сигнал, че терапевтичното лечение е избрано правилно и прогнозата за лечение на хепатит С е благоприятна..
  2. Високата концентрация на вирусни клетки показва, че заболяването е в остра фаза. Кръвта на пациента е опасен източник на инфекция.
  3. Вирусният товар, чиито показатели са на средно ниво, характеризира или хроничния стадий на HVS, или може да има две тенденции на развитие: към неговото увеличаване или намаляване.

Количественият PCR анализ за хепатит С се извършва през цялата антивирусна терапия: след 4, 12 и 24 седмици, чиято цел е да се намали вирусния товар.

В края му - след 6 месеца се прави контролна PCR.

PCR анализ за хепатит В

PCR анализ за хепатит B (B) се извършва за откриване на инфекция (HBV DNA).

Концентрацията на HBV DNA се измерва в копия / ml или me / ml. При оценката на резултатите от проучването те се ръководят от следните показатели:

  • 2x10 ^ 6 - в деветдесет и пет процента от случаите ще станат хронични.

Декодиране на PCR анализ за хепатит

Качественият PCR анализ има два отговора:

  1. отрицателен;
  2. положителен.

PCR отрицателен означава, че в кръвни проби не е открит патоген.

Вероятността за надеждност на резултата е 95%. Останалите 5% са човешка грешка. Тази възможност е разрешена поради високите изисквания за изследването:

  • правила за съхранение на реагенти;
  • подходяща квалификация на медицинския персонал;
  • чистота на биоматериала.

Самият комплект за PCR има 100% диагностична точност.

Количествената PCR за хепатит ви позволява да определите вирусното натоварване върху тялото на пациента. С негова помощ:

  • уточнява се стадият на заболяването (остър, хроничен);
  • определя се ефективността на антивирусното лечение;
  • определя се необходимостта от чернодробна биопсия.

В някои случаи пациентът не усеща признаци на заболяването, докато методът PCR установява инфекция. Това означава, че болестта е в ранен стадий на развитие или в хронична форма. За да се изясни диагнозата, са необходими повече изследвания за ранното започване на антивирусно лечение.

Разходи за PCR диагностика

Държавните клиники правят кръвен тест за PCR безплатно, ако има направление от специалист по инфекциозни болести или хепатолог.

Във всички големи руски градове се предоставят платени услуги за PCR диагностика. Цената зависи от вида на теста, наличното оборудване, времето и други фактори.

  • Висококачественият PCR анализ в Москва и Санкт Петербург ще струва от 600 до 900 рубли. В регионите - от 300 до 800 рубли.
  • Определянето на вирусния товар на хепатит С ще струва 17 000-22 000 рубли. За хепатит B (B) цената на количествено проучване: 1200-10000 рубли.

Предимства и недостатъци на метода PCR

Какви са предимствата на метода на полимеразна верижна реакция пред другите диагностични методи?

  1. Широка гама от приложения. С PCR, използвайки стандартно оборудване, можете да идентифицирате всеки вирус.
  2. Точността на определяне на патогена. Чрез използване на различни комбинации от ензими и техники за анализ се постига 100% спецификация на теста за посочената инфекция.
  3. Висока чувствителност. Техниката ви позволява да откриете наличието на една вирусна молекула в кръвта.
  4. Ефективност. Качественият анализ е готов за няколко часа, количественият за два дни.
  5. Диагностика на вируса по време на инкубационния период. При PCR патогенът се определя не от наличието на антитела, когато вече има имунен отговор на организма, а преди началото на патологичния процес, което улеснява лечението.

Недостатъците на PCR анализа са следствие от неговите предимства:

  • за чистотата на анализа се изисква най-висока степен на чистота, включително въздух в лабораторията, така че „чуждата“ ДНК да не попадне в изследваната проба;
  • високи изисквания към персонала, извършващ вземане на проби и анализ на биоматериал.

Оценката на получените резултати трябва да се извърши от лекуващия лекар, който знае как да отдели истинския анализ от фалшиво положителния (когато лечението вече е приключило, но нежизнеспособният вирус остава в кръвта) и фалшиво отрицателния (когато вирусът не е открит в клиничната картина).

PCR анализ за хепатит С

За поставяне на диагнозата хроничен вирусен хепатит С (CVHC) е необходимо цялостно изследване на човек, което включва клинични, лабораторни и инструментални изследвания. От гледна точка на диагностиката за поставяне на правилна диагноза е методът PCR - полимеразна верижна реакция.

Какво показва този анализ и защо е необходим?

Този лабораторен метод открива РНК на вируса на хепатит С в човешката кръв. Заедно с ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за антитела срещу вируса, PCR се използва за диагностициране на хроничен хепатит С и генотипа на неговия причинител. Това проучване е един от най-новите лабораторни диагностични методи. Надеждността му в CVHC надхвърля 97%, което се счита за много добър показател за изследвания.

Има три PCR кръвни теста за CVHC: качествени, количествени и генотипизиране на вируса. Първото проучване (качествен анализ) за вируса го открива в кръвта, поради което се използва само за поставяне на диагноза.

Второто (количествено) проучване определя степента на вирусно натоварване на тялото, поради което се използва за наблюдение на ефективността на терапията.

Третата PCR (генотипизация) изяснява диагнозата чрез установяване на генотипа на вируса, което е много важно за назначаването на правилното антивирусно лечение.

Същността на техниката на полимеразна верижна реакция е използването на ензими, които многократно умножават генетичния материал на патогена в биоматериала. В процеса на такава репликация епруветка с кръв се загрява и охлажда няколко пъти до температура, необходима за ускоряване на ензимната реакция. В резултат на тези манипулации количеството на вирусния геном се увеличава многократно, което прави възможно откриването му дори с минимално количество.

PCR диагностиката има много предимства пред другите лабораторни тестове:

  • висока чувствителност - 97-98%;
  • гарантирана аналитична специфичност (идентифицира точно патогена, който искате да намерите, а не свързания с него щам);
  • бързина на изпълнение (отнема не повече от 2 дни за получаване на мнение).

Три вида PCR анализи

Висококачествен PCR анализ се предписва на всички пациенти, при които чрез ELISA анализ са открити антитела срещу вируса CVHC. След извършване на качествена PCR могат да се получат два варианта на отговора: „РНК открита“ или „РНК не е открита“. За да се открие минималното количество на вируса в кръвта, са необходими тестови системи с чувствителност най-малко 50 IU / ml. Ако концентрацията на вируса в кръвта на пациента е по-малка, отколкото диагностикумът може да определи, тогава резултатът от теста може да бъде фалшиво отрицателен. За да се избегне такава диагностична грешка, лабораториите, извършващи PCR диагностика, трябва да бъдат снабдени с високочувствителни тестови системи. В лабораторията "Invitro" например се използват тестове с чувствителност 15 IU / ml. Лабораторните служители са задължени да предоставят информация за чувствителността на тестовете на пациентите и лекарите при първото им искане..

Количественият PCR анализ определя степента на виремия, т.е. концентрацията на патогена в кръвта, вирусния товар. Резултатът от това проучване, за разлика от качествената PCR, се изразява в цифри, например 2 × 10 * 6 IU / ml, което означава 2 милиона международни единици в 1 ml кръв. Някои лаборатории използват различен показател - броят на копията / ml. Тези два показателя са лесни за преобразуване: 1 международна единица е равна на 4 копия на РНК. По този начин 2 × 10 * 6 IU / ml ще означава, че 8 × 10 * 6 копия на вирусна РНК в 1 ml се намират в кръвта на пациента, т.е. 8 милиона копия в 1 ml кръв.

Генотипирането е дефиницията на един от шестте генотипа на вируса. Клиничната картина, скоростта на развитие на усложнения от черния дроб и прогнозата за по-късен живот на пациента зависят от генотипа на патогена. Генотипът на вируса е много важен още на етапа на диагнозата, тъй като комбинацията от лекарства и продължителността на терапевтичния курс, който ще бъде предписан на пациента, зависят от правилната му дефиниция..

Въпреки това дори такова на пръв поглед „идеално“ лабораторно изследване има своите недостатъци:

  • по време на проучването се случва репликацията на генетичния материал на всички патогени, дори и на неживите, което може да изкриви резултата. Следователно, за да се следи ефективността с помощта на PCR, повторният анализ се извършва не по-рано от 2 месеца след предишния, така че мъртвите вируси да имат време да "напуснат" тялото на пациента;
  • част от вирусния геном, която се определя с помощта на тестови системи, теоретично може да присъства и при други вируси или микроорганизми, така че съществува възможност за фалшиво положителен отговор;
  • вирусите мутират бързо. Понякога скоростта и степента на мутация на вируса са толкова високи, че тестовата система престава да улавя техния геном. В резултат на това е възможен фалшиво отрицателен резултат..

За да смекчат тези недостатъци, производителите на лабораторни тестови системи за PCR диагностика непрекъснато ги тестват, включително за кръстосани реакции и за чувствителност към определен генотип на вируса..

Как да се направи PCR тест за хепатит С?

За да бъде заключението на изследването по метода PCR надеждно, е необходимо стриктно да се спазват правилата за подготовка за провеждането му:

  • изследването се извършва на празен стомах (глюкоза, мазнини, минерали, които постъпват в кръвта от храната, могат да повлияят на скоростта и качеството на ензимната реакция);
  • разликата между последното хранене и вземането на кръв за анализ трябва да бъде най-малко 8 часа;
  • в навечерието на изследването е забранено приемането на алкохол и яденето на мазни храни, чийто период на елиминиране е продължителен;
  • ден преди да отидете в лабораторията, трябва да се избягва силен физически и емоционален стрес;
  • пушенето не се препоръчва до вземане на кръвни проби.

За да се избегне появата на неверни заключения, предполагаемият пациент трябва да дойде в лабораторията малко по-рано от вземането на кръвната проба. Отнема 15-20 минути на човек да си поеме дъх и да се успокои. Адреналинът в кръвта след бързо ходене може да повлияе на резултата от теста.

Ако пациентът, изпратен за анализ, приема някакви лекарства, той трябва да уведоми лекаря за това. Възможно е да се наложи да откажете да вземете някои от тях за известно време (ако е възможно).

Резултатът от PCR анализа за хепатит С

Дешифрирането на резултатите се извършва от лаборанта на лабораторията, извършила анализа. Декодирането е дефиниция на отклонението на резултата от нормата. Нормата на показателите се определя директно от производителя на тестовата система, която се използва от лабораторията за диагностика. Следователно не би трябвало да е изненадващо, че в някои лаборатории вирусният товар се определя в IU / ml, а в други - в копия / ml..

След като сте получили заключение, трябва да можете да го тълкувате правилно. С тълкуването на резултатите от изследването трябва да се занимава лекуващият лекар на пациент с хепатит С. Само след обективно, инструментално и лабораторно изследване на пациента, лекарят може да получи достатъчно количество данни за компетентна интерпретация на получените резултати от PCR.

Оценката на качествен анализ обикновено е ясна, дори и за пациентите. Резултатът може да бъде само един: „намерен“ или „не намерен“. Освен това вторият от тях е норма.

Количественият анализ е по-труден за тълкуване. Той показва степента на вирусно натоварване на пациента. Дори сред хепатолозите няма консенсус относно това как да се интерпретира откритата виремия. Повечето лекари са склонни да вярват, че натоварване над 8 × 10 * 5 IU / ml трябва да се счита за високо. Счита се, че много голямо натоварване е повече от 1 × 10 * 7 IU / ml, а ниското натоварване е по-малко от 4 × 10 * 5 IU / ml..

Степента на вирусно натоварване показва вирулентността (агресивността) на вируса: колкото повече е количеството му в кръвта, толкова по-бързо могат да се развият усложнения от черния дроб. Високата концентрация на вируса в кръвта на бременна жена увеличава вероятността от проникването му през кръвно-плацентарната бариера към плода. Виремията също влияе върху ефективността на лечението: при ниски стойности ефективността на терапията е по-висока, отколкото при висока.

За да сме сигурни в надеждността на PCR анализа за хепатит С, трябва да се дава предпочитание само на онези лаборатории, които са се доказали добре. В същото време ценовата политика не трябва да играе основна роля..